Maye xromatoqrafiyası ilə kəmiyyət təhlilinin prinsipləri və üsulları

Maye xromatoqrafiyasının ayırma mexanizmi qarışıqdakı komponentlərin iki faza üçün yaxınlıq fərqinə əsaslanır.

Müxtəlif stasionar fazalara görə maye xromatoqrafiya maye-bərk xromatoqrafiya, maye-maye xromatoqrafiya və bağlı faza xromatoqrafiyasına bölünür.Ən çox istifadə edilənlər, doldurucu kimi silisium gel ilə maye-bərk xromatoqrafiya və matriks kimi mikrosilika ilə bağlanmış faza xromatoqrafiyasıdır.

Stasionar fazanın formasına görə maye xromatoqrafiya sütun xromatoqrafiyasına, kağız xromatoqrafiyasına və nazik təbəqə xromatoqrafiyasına bölünə bilər.Adsorbsiya qabiliyyətinə görə onu adsorbsiya xromatoqrafiyası, bölmə xromatoqrafiyası, ion mübadiləsi xromatoqrafiyası və gel keçirmə xromatoqrafiyasına bölmək olar.

Son illərdə, ayırma effektini yaxşılaşdırmaq üçün mobil fazın yüksək təzyiq altında sürətlə axmasını təmin etmək üçün maye sütununun xromatoqrafiya sisteminə yüksək təzyiqli maye axını sistemi əlavə edilmişdir, beləliklə yüksək effektivlik (həmçinin yüksək təzyiq kimi tanınır) maye xromatoqrafiyası meydana çıxmışdır.

HİSSƏ
01 Maye xromatoqrafiyasının kəmiyyət təhlili prinsipi

Keyfiyyət əsasında kəmiyyəti müəyyən etmək üçün standart kimi təmiz maddələr tələb olunur;

Maye xromatoqrafiyasının kəmiyyətinin müəyyən edilməsi nisbətən kəmiyyət metodudur: yəni qarışıqdakı analitin miqdarı təmiz standart nümunənin məlum miqdarından təxmin edilir.

HİSSƏ
02 Maye xromatoqrafiyası ilə kəmiyyətin müəyyən edilməsi üçün əsaslar

Ölçülmüş komponentin miqdarı (W) cavab dəyərinə (A) mütənasibdir (pik hündürlük və ya pik sahəsi), W=f×A.

Kəmiyyət düzəliş əmsalı (f): Kəmiyyət hesablama düsturunun mütənasiblik sabiti, fiziki mənası isə vahid cavab dəyəri (pik sahəsi) ilə təmsil olunan ölçülən komponentin miqdarıdır.

Kəmiyyət korreksiyası faktoru standart nümunənin məlum miqdarından və onun cavab dəyərindən əldə edilə bilər.

Naməlum komponentin cavab dəyərini ölçün və komponentin miqdarı kəmiyyət düzəliş əmsalı ilə əldə edilə bilər.

HİSSƏ
03 Kəmiyyət təhlilində ümumi terminlər

Nümunə (nümunə): tərkibində xromatoqrafik analiz üçün analit olan məhlul.Standart və naməlum nümunələrə bölünür.

Standart: Məlum konsentrasiyası olan təmiz məhsul.Naməlum nümunə (bilinməyən): Konsentrasiyası sınaqdan keçirilməli olan qarışıq.

Nümunənin çəkisi: Sınaq ediləcək nümunənin orijinal çəkisi.

Seyreltmə: Naməlum nümunənin seyreltmə əmsalı.

Komponent: kəmiyyətcə təhlil ediləcək xromatoqrafik zirvə, yəni tərkibi bilinməyən analit.

Komponentin miqdarı (miqdarı): sınaqdan keçiriləcək maddənin tərkibi (və ya konsentrasiyası).

Bütövlük: Xromatoqrafik zirvənin pik sahəsinin kompüter vasitəsilə ölçülməsi üçün hesablama prosesi.

Kalibrləmə əyrisi: Analitin naməlum tərkibini təyin etmək üçün istifadə edilən, standart maddənin məlum miqdarından müəyyən edilmiş komponent tərkibinin cavab dəyərinə qarşı xətti əyrisidir.

HİSSƏ
04 Maye Xromatoqrafiyasının Kəmiyyət Təhlili

1. Kəmiyyət analizi üçün uyğun olan xromatoqrafik metodu seçin:

l Aşkar edilmiş komponentin zirvəsini təsdiq edin və 1,5-dən çox ayırdetmə (R) əldə edin

l Yoxlanılan komponentlərin xromatoqrafik zirvələrinin tutarlılığını (təmizliyini) təyin edin

l Metodun aşkarlama həddini və kəmiyyət həddini müəyyən etmək;həssaslıq və xətti diapazon

2. Müxtəlif konsentrasiyaların standart nümunələri ilə kalibrləmə əyrisini qurun

3. Kəmiyyət üsullarının düzgünlüyünü və dəqiqliyini yoxlayın

4. Nümunələrin toplanması, məlumatların işlənməsi və hesabat nəticələrini həyata keçirmək üçün müvafiq xromatoqrafiya idarəetmə proqramından istifadə edin

HİSSƏ
05 Kəmiyyət zirvələrinin müəyyən edilməsi (keyfiyyət)

Kəmiyyətcə ölçüləcək hər bir xromatoqrafik zirvəni keyfiyyətcə müəyyənləşdirin

Birincisi, ölçüləcək xromatoqrafik pikin saxlanma müddətini (Rt) müəyyən etmək üçün standart nümunədən istifadə edin.Saxlanma müddətini müqayisə edərək, naməlum nümunədə hər bir xromatoqrafik zirvəyə uyğun olan komponenti tapın.Xromatoqrafik keyfiyyət metodu saxlama müddətini standart nümunə ilə müqayisə etməkdir.Kriteriya Qeyri-kafiəlavə təsdiq (keyfiyyətli)

1. Standart əlavə üsulu

2. Eyni zamanda digər üsullardan istifadə edin: digər xromatoqrafik üsullar (mexanizmi dəyişdirin, məsələn: müxtəlif xromatoqrafik sütunlardan istifadə etməklə), digər detektorlar (PDA: spektrin müqayisəsi, spektr kitabxanasının axtarışı; MS: kütləvi spektr analizi, spektr kitabxanasının axtarışı)

3. Digər alətlər və üsullar

HİSSƏ
06 Kəmiyyət Pik Uyğunluğunun Təsdiqi

Xromatoqrafik pik konsistensiyanı (təmizlik) təsdiqləyin

Hər xromatoqrafik zirvənin altında yalnız bir ölçülmüş komponentin olduğundan əmin olun

Birgə ayrılan maddələrin (çirklərin) təsirini yoxlayın

Xromatoqrafik zirvə uyğunluğunun (təmizliyin) təsdiqi üsulları

Spektroqramların Fotodiod Matrisi (PDA) Detektorları ilə müqayisəsi

Pik Saflığın İdentifikasiyası

2996 Saflıq Bucağı Nəzəriyyəsi

07-ci hissədə ümumi istifadə olunan kəmiyyət üsulları

Standart əyri metodu, xarici standart metod və daxili standart metoda bölünür:

1. Xarici standart metod: ən çox maye xromatoqrafiyada istifadə olunur

Standart nümunələr kimi sınaqdan keçirilməli olan birləşmələrin təmiz nümunələrindən istifadə etməklə məlum konsentrasiyaların bir sıra standart nümunələri hazırlanmışdır.cavab dəyərinə (pik sahəsi) qədər sütuna vurulur.
Müəyyən diapazonda standart nümunənin konsentrasiyası ilə cavab dəyəri arasında yaxşı xətti əlaqə var, yəni W= f×A və standart əyri qurulur.

Eyni eksperimental şəraitdə, ölçüləcək komponentin cavab dəyərini əldə etmək üçün naməlum nümunəni yeridin.Məlum olan f əmsalına görə, ölçüləcək komponentin konsentrasiyası əldə edilə bilər.

Xarici standart metodun üstünlükləri:sadə əməliyyat və hesablama, çox istifadə olunan kəmiyyət metodudur;hər bir komponentin aşkarlanmasına və süzülməsinə ehtiyac yoxdur;standart nümunə tələb olunur;standart nümunə ilə naməlum nümunənin ölçmə şərtləri uyğun olmalıdır;enjeksiyonun həcmi dəqiq olmalıdır.

Xarici standart metodun çatışmazlıqları:Təcrübə şərtlərinin yüksək olması tələb olunur, məsələn, detektorun həssaslığı, axın sürəti və mobil fazanın tərkibi dəyişdirilə bilməz;hər bir enjeksiyonun həcmi yaxşı təkrarlanmalıdır.

2. Daxili standart metod: dəqiq, lakin əziyyətli, ən çox standart üsullarda istifadə olunur

Qarışıq etalon hazırlamaq üçün daxili standartın məlum miqdarı standarta əlavə edilir və məlum konsentrasiyalı bir sıra iş standartları hazırlanır.Qarışıq standartda standartın daxili standarta molar nisbəti dəyişməz olaraq qalır.Xromatoqrafik sütuna yeridin və cavab dəyəri olaraq (standart nümunə pik sahəsi/daxili standart nümunə pik sahəsi) götürün.Cavab dəyəri ilə işçi standartın konsentrasiyası arasındakı xətti əlaqəyə görə, yəni W= f×A , standart əyri düzəldilir.

Məlum miqdarda daxili standart naməlum nümunəyə əlavə edilir və ölçüləcək komponentin cavab dəyərini əldə etmək üçün sütuna vurulur.Məlum olan f əmsalına görə, ölçüləcək komponentin konsentrasiyası əldə edilə bilər.

Daxili standart metodun xüsusiyyətləri:Əməliyyat zamanı nümunə və daxili etalon bir-birinə qarışdırılır və xromatoqrafik sütuna vurulur, belə ki, ölçülən komponentin miqdarının qarışıq məhluldakı daxili standarta nisbəti sabit olduğu müddətdə nümunənin həcminin dəyişməsi kəmiyyət nəticələrinə təsir etməyəcək..Daxili standart metod nümunə həcminin, hətta mobil fazanın və detektorun təsirini kompensasiya edir, buna görə də xarici standart metoddan daha dəqiqdir.

HİSSƏ
08 Kəmiyyət təhlili nəticələrinə təsir edən amillər

Zəif dəqiqliyə səbəb ola bilər:

Yanlış pik sahəsi inteqrasiyası, nümunənin hazırlanması zamanı daxil olan nümunənin parçalanması və ya çirkləri, nümunə flakonu möhürlənməmiş, nümunə və ya həlledicinin buxarlanması, yanlış nümunə hazırlanması, nümunənin enjeksiyon problemləri, yanlış daxili standart hazırlanması

Zəif dəqiqliyin mümkün səbəbləri:

Yanlış pik inteqrasiyası, enjeksiyon və ya enjektor problemləri, nümunənin parçalanması və ya nümunənin hazırlanması zamanı daxil olan çirklər, xromatoqrafiya problemləri, deqradasiya edilmiş detektor reaksiyası